Carolina Marotta Ribeiro
MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO
Instituto de Veterinária
Departamento de Epidemiologia e Saúde Pública
Edital FAPERJ Nº 44/2014 – (Parceria CAPES/FAPERJ)
PROGRAMA DE APOIO AO PÓS-DOUTORADO NO ESTADO DO RIO DE JANEIRO – PAPDRJ – 2014
Proponente: Adivaldo H. Fonseca – http://r1.ufrrj.br/adivaldofonseca/
Bolsista: Carolina Marotta Ribeiro
Título do Projeto:
Isolamento, caracterização molecular e produção de antígeno de patógenos transmitidos por carrapatos
Plano de Atividades:
Os trabalhos de laboratório serão executados no Laboratório de Doenças Parasitárias, Laboratório de hemoparasitos e vetores e no Laboratório de Biologia Molecular Multiusuário sediados no Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias da UFRRJ.
- Treinamento da candidata com relação a normas de Biossegurança e Manuseio de Material Biológico;
- Levantamento bibliográfico sobre os temas abordado;
- Preparo semanal/diário de meios de cultivo para manutenção das linhagens de células rotineiramente mantidas nos Laboratórios;
- Preparo semanal/diário de meios de cultivo para manutenção dos hemoparasitos rotineiramente mantidas nos Laboratórios. P. ex: Trypanosoma, Borrelia sp., Ehrlichia sp., Anaplasma sp., Rickettsia sp.;
- Preparo de listagens de material de consumo/meios específicos para reposição e aquisição;
- Rotina de lavagem, desinfecção e esterilização das vidrarias e material utilizados no cultivo celular;
- Rotina de lavagem, desinfecção e esterilização das vidrarias e material utilizados na rotina em Biologia Molecular, RIFI e ELISA;
- Coleta de sangue, carrapatos e pulgas nas diferentes regiões fisiográficas do estado do Rio de Janeiro;
- Identificação parasitológica de ectoparasitos coletados a campo;
- Realização de trabalhos permanentes envolvendo a execução de técnicas de diagnóstico celular, Imunofluorescência, Imunoenzimático e molecular;
- Rotina de extração de DNA, realização da técnica de PCR e RT PCR;
- Rotina de execução de RIFI e ELISA;
- Rotina de manutenção de bezerros, coelhos e cobaios como suporte para manutenção de colônias de 4 espécies de Ixodídeos e 3 espécies de Argasídeos;
- Participação nas atividades inerentes ao diagnóstico de ecto e endoparaistoses, incluindo apoio na realização das aulas práticas nas diferentes disciplinas para Graduação e Pós-Graduação.
- Rotina de cuidados com a biossegurança, limpeza e organização dos laboratórios.
O cultivo in vitro de parasitos dos gêneros Trypanosoma, Anaplasma, Ehrlichia e Borrelia em células de carrapatos ou meios específicos terão as seguintes etapas:
- Obtenção e manutenção das diferentes linhagens de hemoparasitos – etapa já realizadas para a maioria dos hemoparasitos. Introdução de novos isolados a partir de coletas do campo;
- Manutenção de bovinos, coelhos e galinha doméstica, para doação semanal de sangue;
- Coleta de sangue dos diferentes hospedeiros para realização da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), RIFI e ELISA;
- Preparo rotineiro dos meios de cultivo e troca semanal para todos hemoparasitos;
- Infecção in vitro de fêmeas do carrapato Rhipicephalus microplus, R. sanguineus ou Dermacentor nitens através de alimentação artificial;
- Manutenção da colônia de R. microplus livre de patógenos;
- Padronização e aperfeiçoamento das técnicas de alimentação artificial de carrapatos por meio de tubos capilares e membrana de silicone, para cada hemoparasitos;
- Infecção in vitro de fêmeas parcialmente ingurgitadas de R. microplus;
- Detecção da infecção in vitro pelos diferentes agentes em fêmeas de carrapatos a partir do exame direto da hemolinfa, estudos histológicos, imunohistoquímicos e moleculares dos órgãos dos carrapato;
- Acompanhamento diário das fêmeas infectadas in vitro para o registro de possíveis efeitos dessa infecção sobre os parâmetros biológicos da fase não parasitária.
Em 05 de dezembro de 2018
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Adivaldo H. Fonseca
Prof. Titular UFRRJ